Ágar Base Uréia (Christensen)

Princípio:

Utilizado para determinar a habilidade do organismo de desdobrar a uréia em amônia, pela ação da enzima urease, resultando em alcalinização do meio.

Fórmula:

Peptona de carne 1 g
Glicose 1 g
Cloreto de sódio 5 g
Fosfato dissódico 1,2 g
Fosfato de potássio 0,8 g
Vermelho de fenol 0,012 g
Ágar ágar 15 g
Água destilada 1000 mL
pH final = 6,8

Preparo:

Meio na fórmula comercial de pó desidratado, não havendo necessidade de ser formulado. Meio utilizado Ágar Base Uréia (Christensen).

Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante, adicionar em balão, já contendo a metade da água, homogeneizar, acrescentar o restante da água e aquecer levemente até fundir o meio, sob agitação constante.

Em seguida, tamponar o balão com rolha de algodão hidrófobo, embalar, rotular e autoclavar a 120° C por 15 minutos.

Após autoclavação, resfriar até 50° C e adicionar assepticamente 10ml da solução base de uréia a 40% (esterilizada por filtração), para cada 100ml de base. Homogeneizar e distribuir assepticamente 3ml em tubos 12 mm x 75 mm, já estéril .

Deixar solidificar a temperatura ambiente inclinando cada tubo em ângulo de 45°. Após completa solidificação do meio, armazenar na geladeira em recipiente fechado para que o meio não desidrate.

Após preparo o meio apresenta coloração âmbar ou amarelo-pálido.

Observação: Existem no mercado diversas marcas de meios, onde se torna indispensável à leitura das instruções de preparo, pois alguns já contêm uréia em sua fórmula, e não contêm ágar.

Controle de qualidade

Positivo: Proteus vulgaris ATCC 13315

Negativo: Escherichia coli ATCC 25922

Inoculação:

Inocular colônia pura de 18 a 24 horas;

Fazer um inóculo denso;

Semear na superfície do meio.

Incubar 35° C de 6 a 24 horas, podendo ser necessário até 6 dias.

Interpretação:

Negativo

 Negativo= sem alteração da cor do meio.

Positivo

 Positivo= cor-de-rosa pela utilização da uréia pela bactéria, alcalinizando o meio.

1- Solução de uréia a 40%

Fórmula:

Uréia 40 g
Água destilada 100 mL

Preparo:

Pesar a uréia e juntar a água em um becker, levar ao banho maria para dissolver. Homogeneizar e esterilizar por filtração. Distribuir assepticamente em frasco âmbar já estéril. Armazenar em geladeira.