Ágar Citrato de Simmons

Princípio:

É utilizado para diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias e não fermentadores. Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia, alcalinizando o meio, o indicador é o azul de bromotimol.

Fórmula:

Fosfato monobásico de amônio 1 g
Fosfato dipotássio 1 g
Cloreto de sódio 5 g
Citrato de sódio 2 g
Sulfato de magnésio 0,2 g
Azul de bromotimol 0,08 g
Ágar ágar 15 g
Água destilada 1000 mL
pH final = 6,9

Preparo:

Meio na fórmula comercial de pó desidratado, não havendo necessidade de ser formulado. Meio utilizado Agar Citrato de Simmons.

Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante, adicionar em balão e aquecer levemente sob agitação constante até completa dissolução do ágar.

Em seguida, distribuir 3 mL em tubos 12 mm x 75 mm, tamponar cada tubo com rolha de algodão hidrófobo, autoclavar a 120° C por 15 minutos.

Após autoclavação, inclinar os tubos um a um, num ângulo de 45° para solidificar a temperatura ambiente. Após completa solidificação armazenar na geladeira em recipiente fechado, para que o meio não desidrate.

Conservação e validade:

Conservar de 4 a 10° C de 6 a 8 semanas;

Após este período realizar controles negativo e positivo semanalmente.

Controle de qualidade

Positivo:Klebsiella pneumoniae ATCC 13883.

Negativo:Escherichia coli ATCC 25922.

Inoculação:

Inocular a bactéria fazendo estrias apenas na superfície inclinada do meio.

Incubar em estufa bacteriológica a 37ºC por 18 a 24 horas.

Interpretação:

Cor original do meio: verde

Positivo : cor azul ou crescimento no local do inóculo.

Negativo: não há crescimento e a cor permanece inalterada.

Leitura inicial com 24 horas, se o resultado for positivo: encerrar o teste, se o resultado negativo ou houver dúvida: reincubar por mais 24/48 horas.

Negativo
 Negativo= permanece inalterado, não há crescimento.
Positivo
 Positivo= as bactérias que utilizam o citrato alcalinizam o meio provocando o aparecimento da cor azul ou Crescimento no local do inóculo.