Caldo de VM - VP (Vermelho de Metila e Voges-Proskauer)
Princípio:
Meio utilizado para avaliar a via fermentativa de utilização da glicose pelas enterobactérias utilizando os testes de Vermelho de Metila e Voges-Proskauer.
Após preparo o meio apresenta coloração âmbar claro.
Fórmula:
| Peptona tamponada | 7 g |
| Fosfato dipotássico | 5 g |
| Glicose | 5 g |
| Água destilada | 1000 mL |
| pH final = 6,9 | |
Preparo:
Meio disponível comercialmente, não havendo necessidade de ser formulado. Meio utilizado Meio de MR – VP.
Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante. Distribuir 2mL em tubos, 12 mm x 75 mm, fechar cada tubo com rolha de algodão hidrófobo e autoclavar a 120° C por 15 minutos. Cor original do meio amarelo pálido .
Inoculação:
Utilizar colônia pura de 18 a 24 horas;
Fazer um inóculo denso;
Pingar 2 gotas do inóculo ou, com uma alça bacteriológica flambada e resfriada, inocular diretamente a bactéria no caldo.
Incubar 35°C de 18 a 24 horas
Prova do VM (vermelho de metila)
Após a incubação da cultura, adicionar 0,2mL ou 5 gotas do indicador pela parede do tubo (sem agitar), que formará um anel acima da cultura
Interpretação da Prova do VM
Positivo : coloração vermelha
Negativo: coloração amarela ou acastanhada
Prova do VP
Após a incubação da cultura, adicionar 0,6 mL de BARRITT I ao caldo. A seguir adicionar 0,2 mL de BARRITT II e agitar vigorosamente por aproximadamente 3 minutos. Depois de decorrido pelo menos 5 minutos, verificar a coloração do caldo.
Interpretação da Prova do VP
Positivo : coloração rósea, tijolo ou vermelha
Negativo : coloração amarela ou acastanhada
1- Indicador para Prova de VM (Vermelho de Metila)
Fórmula:
| Vermelho de metila | 0,1 g |
| Álcool etílico 95% | 300 mL |
| Água destilada | 200 mL |
Preparo:
Em um becker dissolver o vermelho de metila no álcool, após completa dissolução acrescentar a água destilada.
Armazenar em frasco âmbar em geladeira.
2 - Indicadores para prova de VP (Voges- Proskauer): (Segundo Barritt)
2.1 - Barritt I
Fórmula:
| Vermelho de metila | 0,1 g |
| Álcool etílico 95% | 300 mL |
| Água destilada | 200 mL |
Preparo:
Em um becker dissolver o vermelho de metila no álcool, após completa dissolução acrescentar a água destilada.
Armazenar em frasco âmbar em geladeira.
2.2 - Barritt II
Fórmula:
| Hidróxido de potássio (KOH) | 40 g |
| Água destilada | 100 mL |
Preparo:
Colocar o hidróxido de potássio e a água em um balão e levar ao banho-maria 65°C para dissolver o hidróxido. Após a completa dissolução, armazenar a solução em frasco âmbar na geladeira.
