Caldo Malonato - Fenilalanina
Princípio:
Meio de malonato é utilizado para verificar se a bactéria utiliza malonato de sódio como única fonte de carbono e sulfato de amônio como única fonte de nitrogênio. O caldo de fenilalanina serve para verificar a capacidade da bactéria em produzir ácido fenilpirúvico a partir da fenilalanina por ação enzimática.
Fórmula:
| Extrato de levedura | 1 g |
| Sulfato de amônia | 2 g |
| Fosfato de potásio | 0,6 g |
| Fosfato monopotásio | 0,4 g |
| Cloreto de sódio | 2 g |
| Malonato de sódio | 3 g |
| L-phenylalanina | 1 g |
| Azul de bromotimol | 0,025 g |
| Água destilada | 1000 mL |
| pH final = 6,6 | |
Preparo:
Meio na fórmula comercial de pó desidratado, não havendo necessidade de ser formulado. Meio utilizado Caldo Malonato-Fenilalanina.
Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante, colocar em balão e homogeneizar até completa dissolução.
A seguir distribuir 2mL em tubos 12 mm x 75 mm, tamponar cada tubo com rolha de algodão hidrófobo, autoclavar a 120° C por 15 minutos.
Inoculação:
Utilizar colônia pura de 18 a 24 horas;
Fazer um inóculo denso;
Pingar 2 gotas do inóculo ou, com uma alça bacteriológica flambada e resfriada, inocular diretamente a bactéria no caldo.
Incubar 35°C de 18 a 24 horas
Prova do Malonato
Controle de qualidade:
Positivo: Klebsiella pneumoniae
Negativo: Escherichia coli
Interpretação:
As bactérias ao utilizarem o malonato de sódio, alcalinizam o meio, virando o indicador de azul de bromotimol, provocando mudança na coloração verde do meio para azul.
Positivo: azul
Negativo: o meio permanece verde (inalterado)
Prova da Fenilalanina
Controle de qualidade:
Positivo: Proteus mirabilis, ATCC 124533
Negativo: Escherichia coli, ATCC 25922
Interpretação:
Após a leitura da prova do Malonato, adicionar 1 ou 2 gotas de HCl 1N ao caldo, que deverá ficar amarelo. Adicione em seguida 2 ou 3 gotas da solução de cloreto férrico.
Positivo: aparecimento da cor verde.
Negativo: o caldo permanecerá amarelo.
1 - Solução de Cloreto Férrico
Utilizado para revelar a atividade da enzima fenilalanina desaminase no meio de fenilalanina.
Fórmula:
| Cloreto férrico | 10 g |
| Água destilada | 100 mL |
Preparo:
Pesar o cloreto e colocar em frasco âmbar juntamente com a água, homogeneizar até completa dissolução. Armazenar em geladeira.
