Caldo para Fermentação de Carboidratos
Princípio:
Meio utilizado para verificar a habilidade das bactérias em fermentar diversos carboidratos.
Após preparo o meio apresenta coloração verde.
Fórmula:
| Peptona de caseína | 10 g |
| Extrato de carne | 1 g |
| Cloreto de sódio | 5 g |
| Solução de azul de bromotimol 1/500 | 25 mL |
| Água destilada | 1000 mL |
Preparo:
Pesar todos os reagentes um a um e adicionar em um balão com a água, homogeneizar até a completa dissolução e ajustar o pH 6,4.
Distribuir em 10 balões 100 mL do caldo em cada um. Adicionar o carboidrato desejado previamente pesado na concentração de 1g para cada 100 mL do caldo base.
Homogeneizar e distribuir 2 mL em tubos 12 mm x 75 mm, tampando com rolha de algodão hidrófobo cada um deles. Autoclavar 110° C por 10 minutos ou em vapor fluente por 20 minutos.
Armazenar na geladeira , em recipiente fechado para que o meio não desidrate.
Conservação e validade:
Conservar de 4 a 10°C de 6 a 8 semanas.
1 - Carboidratos utilizados para o caldo base
Utilizar 1g de um destes carboidratos para cada 100 mL de caldo base (Sacarose, Lactose, Maltose, Arabinose, Trealose, Xilose, Adonitol, Inositol, Manitol, Sorbitol, Salicina, Dulcitol).
Inoculação:
Inocular duas gotas de uma suspensão bacteriana a cada um dos tubos de carboidratos.
Incubar em estufa bacteriológica a 37° C por 18 a 24 horas.
Controle de qualidade:
| Adonitol | Arabinose | Inositol | Lactose | Maltose | Manitol | Sacarose | Sorbitol | Xilose | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Positivo | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae | Klebsiella pneumoniae |
| Negativo | Shigella sonnei | Proteus mirabilis | Shigella sonnei | Shigella sonnei | Morganella morganii | Proteus mirabilis | Shigella sonnei | Proteus mirabilis | Shigella sonnei |
Interpretação:
Positivo : aparecimento de coloração amarela devido à fermentação do carboidrato.
Negativo: permanece inalterado, pois não houve fermentação.
2- Solução de azul de bromotimol 1/500
Fórmula:
| Azul de bromotimol | 1 g |
| Hidróxido de sódio N/10 | 20 mL |
| Água destilada (qsp) | 500 mL |
Preparo:
Adicionar tudo em um recipiente âmbar e homogeneizar até a completa dissolução. Para estocar é necessário envolver o frasco com papel alumínio afim de que seja protegido da ação direta da luz. Armazenar em temperatura ambiente.
3 - Hidróxido de Sódio (NaOH) N/10
Fórmula:
| Hidróxido de sódio | 0,1 g |
| Água destilada (qsp) | 25 mL |
Preparo:
Adicionar em um recipiente âmbar e homogeneizar, até a completa dissolução. Para estocar é necessário envolver o frasco com papel alumínio afim de que seja protegido da ação direta da luz. Armazenar em temperatura ambiente.
