Caldo para Descarboxilação de Aminoácidos
Princípio:
Usado para verificar a descarboxilação dos aminoácidos arginina, ornitina e lisina.
Após preparo o meio apresenta coloração lilás.
1 - CALDO FALKOW
Fórmula:
| Peptona de caseína | 2,5 g |
| Extrato de levedura | 1,5 g |
| Glicose | 0,5 g |
| Solução alcóolica de púrpura de bromocresol | 1 mL |
| Água destilada | 500 mL |
Preparo:
Pesar todos os componentes um a um e ir adicionando em um balão contendo a água destilada. Homogeneizar até a completa dissolução.
Distribuir em 4 balões, 100 mL do caldo base em cada um deles. Acrescentar 1g de um dos L- aminoácidos para cada 100mL de meio base (1g de L-arginina para um dos 100mL de base e o mesmo com L-lisina e L-ornitina) Uma das partes (100 mL) será o controle do meio no qual não será adicionado nenhum aminoácido.
Homogeneizar e distribuir 2mL em tubos 12 mm x 75 mm, tamponar cada tubo com rolha de algodão hidrófobo, autoclavar a 110° C por 10 minutos, ou em vapor fluente por 20 minutos.
Rotular cada tubo e armazenar na geladeira , em recipiente fechado para que o meio não desidrate.
Pode ser utilizado meio na formula comercial de pó desidratado, não havendo necessidade de ser formulado, como o Caldo Moeller Descarboxilase.
Conservação e validade:
Conservar de 4 a 10°C de 6 a 8 semanas.
Inoculação:
Inocular duas gotas de uma suspensão bacteriana ao caldo. Após a inoculação da colônia, adicionar 0,5mL de óleo mineral estéril em cada um dos tubos de aminoácido.
Incubar em estufa bacteriológica a 37° C por 18 a 24 horas.
Controle de qualidade:
Lisina:
Positivo: Klebsiella pneumoniae
Negativo: Enterobacter cloacae
Arginina:
Positivo: Enterobacter cloacae
Negativo: Klebsiella pneumoniae
Ornitina:
Positivo: Enterobacter cloacae
Negativo: Klebsiella pneumoniae
Interpretação:
A fermentação da glicose indica que o organismo é viável (sempre fazer um tubo teste, que contém apenas glicose, não contém aminoácido) e o meio fica amarelo.
A descarboxilação do aminoácido é indicada pela coloração púrpura.
Enterobactéria positiva: desenvolve a cor roxa intenso
Enterobactéria Negativo: desenvolve a cor amarela
Tubo controle: amarelo (utiliza apenas a glicose)
2 - Solução Alcoólica de Púrpura de Bromocresol
Fórmula:
| Púrpura de bromocresol | 0,2 g |
| Álcool 95° | 20mL |
Preparo:
Pesar a púrpura e adicionar em frasco âmbar contendo o álcool, homogeneizar até a completa dissolução, Armazenar a temperatura ambiente. É necessário envolver o frasco com papel alumínio afim de que seja protegido da ação direta da luz.
3 - Aminoácidos para o caldo descarboxilase
Fórmula:
| L-Lisina | 1 g para 100 mL de meio base |
| L-Arginina | 1 g para 100 mL de meio base |
| L-Ornitina | 1 g para 100 mL de meio base |
Preparo:
Se for usado D-aminoácidos será na concentração de 2% e se for somente aminoácido na concentração de 0,5%
