Meio de OF (para oxidação e fermentação)

Princípio:

Meio utilizado para a diferenciação de bacilos Gram-negativos quanto à capacidade do microrganismo em utilizar os carboidratos pela via oxidativa ou fermentativa.

O meio de OF contém uma alta concentração de carboidratos (1%) e uma pequena concentração de peptona (0,2%), que facilita a utilização dos carboidratos de forma oxidativa pelos bacilos Gram negativos não fermentadores da glicose.

Após preparo o meio apresenta coloração verde.

A reação positiva é indicada pela cor amarela.

Fórmula:

Triptona 2 g
Cloreto de sódio 5 g
Fosfato dipotássico 0,3 g
Ägar ágar 2,5 g
Azul de bromotimol 0,03 g
Água destilada 1000 mL
pH final = 7,1

Preparo:

Meio na fórmula comercial de pó desidratado, não havendo necessidade de ser formulado. Meio utilizado é o OF Basal.

Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante. Colocar em balão e fundir sob agitação constante até completa dissolução do ágar.

Distribuir volumes iguais em diferentes balões, dependendo do número de carboidratos que serão preparados.

Para cada 100 mL de meio base, acrescentar 1g de um dos carboidratos, homogeneizar e distribuir 3mL em tubos 13mm x 100mm, com tampa de rosca.

Autoclavar a 110° C por 15 minutos. Poderá ser esterilizado também em vapor fluente por 20 minutos.

Após esterilização, deixar a temperatura ambiente para solidificar na posição vertical, Armazenar em geladeira.

Conservação e validade:

Conservar embalado de 4 a 8°C por até 3 meses.

Inoculação:

São necessários dois tubos para a prova de OF de glicose. Com o fio bacteriológico inocula-se uma colônia a ser pesquisada.

Em seguida colocar esterilmente em um dos tubos 0,5 mL de óleo mineral estéril.

Incubar em estufa bacteriológica a 35° C por 18 a 24 horas.

Interpretação:

A produção de ácido é detectada no meio através do aparecimento de uma cor amarela, no caso de organismos oxidativos, pode-se notar primeiro a produção de cor próxima à superfície do meio.


TUBO ABERTO (sem óleo)   TUBO FECHADO (com óleo)   RESULTADO
Amarelo : ácido verde : alcalino Metabolismo oxidativo
Amarelo : ácido Amarelo : ácido Metabolismo fermentativo

Verde : alcalino Verde : alcalino Não sacarolítico